Gibson cloning inafanyaje kazi?
Gibson cloning inafanyaje kazi?

Video: Gibson cloning inafanyaje kazi?

Video: Gibson cloning inafanyaje kazi?
Video: Как имитировать сборку Гибсона 2024, Novemba
Anonim

The Gibson Cloning Master Mix ina vimeng'enya vitatu tofauti ndani ya bafa moja. Kila kimeng'enya kina utendakazi mahususi na wa kipekee kwa mmenyuko: T5 Exonuclease - huunda viambato vya DNA 3' ya uzi mmoja kwa kutafuna kutoka mwisho wa DNA 5'. Vipande vya DNA vinavyosaidiana vinaweza baadaye kuunganishwa.

Kwa kuzingatia hili, Gibson anafanya kazi vipi?

The Gibson Assembly® mbinu ni utaratibu wa cloning ambayo inaruhusu cloning ya vipande viwili au zaidi bila hitaji la kizuizi cha usagaji wa kimeng'enya au maeneo yanayolingana ya vizuizi. Badala yake, ncha zinazopishana zilizobainishwa na mtumiaji hujumuishwa kwenye vipande ili kuruhusu uunganisho usio na mshono wa vipande vilivyo karibu.

Vile vile, ni nini katika Mchanganyiko wa Mwalimu wa Mkutano wa Gibson? The Gibson Cloning Master Mix lina vimeng'enya vitatu tofauti ndani ya bafa moja. Kila kimeng'enya kina utendakazi mahususi na wa kipekee kwa mmenyuko: T5 Exonuclease - huunda viambato vya DNA 3' ya uzi mmoja kwa kutafuna kutoka mwisho wa DNA 5'. Vipande vya DNA vinavyosaidiana vinaweza baadaye kuunganishwa.

Kwa namna hii, kusanyiko la Lango la Dhahabu hufanyaje kazi?

Lango la Dhahabu cloning au Mkutano wa Golden Gate ni njia ya uundaji wa molekuli ambayo inaruhusu mtafiti kukusanya kwa wakati mmoja na kwa mwelekeo vipande vingi vya DNA kwenye kipande kimoja kwa kutumia vimeng'enya vya kizuizi cha Aina ya II na ligase ya DNA ya T4. Hii mkusanyiko ni iliyofanywa katika vitro.

Je! Upangaji wa Gateway hufanya kazi vipi?

The GATEWAY Cloning Teknolojia inategemea mfumo wa ujumuishaji wa tovuti mahususi unaotumiwa na phage l kuunganisha DNA yake katika E. Tovuti za attL na attR zinazozunguka DNA ya fagio iliyoingizwa huchanganya tena tovuti-haswa wakati wa tukio la kukatwa ili kurekebisha tovuti ya attP katika fage l na tovuti ya attB katika E.

Ilipendekeza: